CULTIVO IN VITRO DE Sprekelia formosissima Herbert. MATERIALES Y MÉTODOS

CULTIVO IN VITRO DE Sprekelia formosissima Herbert.
MATERIALES Y MÉTODOS
Localización del sitio experimental. La investigación se llevó a cabo en el laboratorio de Propagación in vitro de Fruticultura, ubicado en las instalaciones del Colegio de Posgraduados en Montecillo, Edo. de México y en un invernadero del Centro de Desarrollo e Investigación Agropecuaria (CEDIA) de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Autónoma del Estado de Morelos.
Material vegetal. El material vegetal que se utilizó fueron bulbos de Sprekelia formosissima de 4 a 5 cm de diámetro que se colectaron en las áreas de vegetación
natural de la Universidad Autónoma del Estado de Morelos.
Establecimiento del cultivo aséptico. Para esta fase se utilizó el medio de cultivo Murashigue y Skoog (1962) suplementado con NaH2PO4 (0.170 mg L-1), inositol (100 mg L-1), tiamina (0.4 mg L-1), piridoxina (1.0 mg L-1), niacina (1.0 mg L-1), glicina (0.4 mg L-1), sulfato de adenina (80 mg L-1), bencil adenina (BA) (2.0 mg L-1), ácido 3-indolbutírico (0.2 mg L-1), sacarosa (3 %), agar (0.8 %). El pH se ajustó a 5.7 antes de agregar el agar; después de disolver el agente gelificante, el medio fue distribuido en frascos de cultivo tipo gerber en alícuotas de 20 mL.
Los bulbos se limpiaron, eliminando las escamas muertas (de color café) hasta observar las escamas blancas y turgentes. Los bulbos limpios se lavaron con jabón antibacterial y agua destilada estéril en agitación por 5 minutos; se enjuagaron 3 a 4 veces con agua destilada estéril. Posteriormente, se desinfectaron con cloro comercial al 20 %, más cinco gotas de Tween 20 por cada 100 m L-1 de solución, en agitación durante 20 minutos y posteriormente se enjugaron 5 veces con agua destilada estéril. Para la obtención de explantes, se seccionaron los bulbos en porciones de 1 cm2 tomados de la parte basal de las escamas. Se colocaron cuatro explantes por frasco. A las seis semanas se realizó la evaluación registrando porcentaje de contaminación, número de explantes con brote, brotes por explante y número de hojas por brote. Los brotes se utilizaron para el establecimiento del experimento de multiplicación de bulbillos.

Fuente: CULTIVO IN VITRO DE Sprekelia formosissima Herbert. Marisol Cazarez-Prado1, María Andrade-Rodríguez1*, J. Jorge Ayala-Hernández2, Iran Alia-Tejacal1, Oscar G. Villegas-Torres1, Victor López-Martínez1, Carlos Manuel Acosta-Durán1